慢病毒包装试剂盒

慢病毒包装试剂盒 Lentiviral Packaging Kit

产品介绍

    慢病毒经浓缩后，可以高效地将基因稳定地整合到宿主基因组中，特别适合用于难以通过常规方法转染的细胞，如神经细胞、干细胞和免疫细胞如原代T细胞等。IPHASE 慢病毒包装试剂盒提供了慢病毒包装所需用到的所有试剂，包含了慢病毒包装质粒混合物Lentivirus Packaging Plasmid Mix、转染试剂Transfect Reagent、对照质粒eGFP Plasmid （AMP+）和慢病毒浓缩液Lentivirus Titer-enhanced Solution，省去了试验前准备的繁琐过程，可直接使用，通过使用配套的浓缩液可以有效提高病毒滴度，提高慢病毒转染便利性。试剂盒中各组成成分经过严格的质量检测，实验结果准确、可靠、重现性好。

产品详情

中文名称：慢病毒包装试剂盒 Lentiviral Packaging Kit

英文名称：Lentiviral Packaging Kit

规格：10 Test

保质期：1年

保存条件：A盒——-15~-25℃，B盒——2~8℃

产品关键词：慢病毒、慢病毒包装、慢病毒浓缩液、细胞转染

产品组分：

使用方法

    提前制备转染所需的293T细胞，使用Transfect Reagent把包装质粒、包膜质粒和目标DNA eGFP 质粒共转染进293T细胞，细胞转染6h后把培养基更换为完-全培养基，培养48h-72h，收集富含慢病毒颗粒的细胞上清液，并使用lentivirus titer-enhanced solution对收集的上清液浓缩后得到高滴度的慢病毒浓缩液，可在293T细胞或者慢病毒滴度试剂盒中测定病毒滴度。在一定滴度范围内的慢病毒颗粒可以满足大部分体内体外实验需求。

1 细胞准备

1）将处于对数增长期的293T细胞按照6million/皿的两传代到100mm培养皿中，置于5%的二氧化碳培养箱中培养，当细胞融合率达到80%左右时准备转染。

2）转染前1~2 h按照12mL/皿的量为需要转染的细胞更换新鲜的DMEM基础培养基。

注：293T细胞贴壁性不好，更换培养基时应尽量避免冲起293T细胞。

2   转染

1）  请于冰浴条件下解冻Lenti Packaging Plasmid Mix和eGFP Plasmid，并混合均匀。

注：Lenti Packaging Plasmid Mix和eGFP Plasmid需在-20℃冷冻保存，切勿反复冻融，若一次用不完，可于第一次化冻后按照需求量分装并冻存。

2）准备两个1.5ml无菌离心管，分别标记为管A和管B，按照以下表格进行体系配制：

3）混合均匀，并于室温条件下平衡5min，备用。

4）将管A和管B的溶液合并，混合均匀后于室温放置 18~20min 。

5）将混合液均匀滴加到预处理好的293T细胞培养皿中，放置在 CO2培养箱中培养。

6）转染6h~8h后，小心吸掉细胞培养液弃于盛有消毒液的废液杯中，然后加15mL完-全培养基继续培养。

注：此时培养基与所用的移液枪头等都已含有少量的病毒，必须经消毒液浸泡处理后才能丢弃。

3 收集与浓缩

1）换液48h~72h后，转移细胞上清液至50mL离心管，4℃，500g离心5min。

2）  收集离心后上清液，使用0.45μm滤器过滤后至新的离心管中。

3）按1：3比例加入Lentivirus Titer-enhanced Solution进离心后的上清液，2℃~8℃冰箱放置过夜。

4）4℃，1500g 离心 60min，弃上清。

5）加入原1/10或1/100的DMEM基础培养基，建议使用转染目标细胞培养基重悬，于-60℃~-90℃冰箱保存。

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