人外周血单个核细胞 Human PBMC

人外周血单个核细胞 Human PBMC

外周血单个核细胞（Peripheral blood mononuclear cell，PBMC）是指外周血中具有单个细胞核的细胞，包括淋巴细胞，单核细胞等。

提取方法：
全血样本聚蔗糖-泛影葡胺（Ficoll-Hypaque）密度梯度离心分离

其他种属PBMC

猴外周血单个核细胞 Monkey PBMC

大鼠外周血单个核细胞 Rat PBMC

小鼠外周血单个核细胞 Mouse PBMC

比格犬外周血单个核细胞 Dog PBMC

猪外周血单个核细胞 Minipig PBMC

兔外周血单个核细胞 Rabbit PBMC

外周血单个核细胞（Peripheral Blood Mononuclear Cell，PBMC），是指外周血中具有单个核的细胞，包括淋巴细胞（Lymphocyte）、单核细胞（Monocyte）、树突状细胞（DC）和其他少量细胞。PBMC可利用健康人或动物供体的外周血，通过Ficoll密度梯度离心，磁珠分选等步骤获得，主要包括淋巴细胞和单核细胞。

Ficoll是蔗糖的多聚体，中性，平均分子量400,000，当密度为1.2g/mL，未超出正常生理性渗透压，也不穿过生物膜。红细胞、粒细胞比重大，离心后沉于管底；淋巴细胞和单核细胞的比重小于或等于分层液比重，离心后漂浮于分层液的液面上，也可有少部分细胞悬浮在分层液中。吸取分层液液面的细胞，就可从外周血中分离到单个核细胞。

人外周血单个核细胞 Human PBMC

不同细胞类型的比例
PBMC中大部分都是淋巴细胞，包括B细胞和T细胞，其中CD3 T细胞又占了淋巴细胞中绝大部分(45-70%)。这些T细胞都处于初始（naive）状态，即已经成熟了但没有受到抗原刺激。 在正常人中，只有非常小的一部分初始T细胞会因抗原识别而被激活。同样的B细胞也都处于初始状态。相对于淋巴细胞，单核细胞的比例在10-30%，收到刺激之后会发育成树突状细胞(DC)或巨噬细胞。干细胞的比例非常低，只有0.1-0.2%，因此很难从全血样本中分离到。

细胞运输与保存
（1）干冰运输，收到细胞后立即转入液氮冻存或直接复苏；
（2）T25瓶运输细胞，收到后应继续生长，传代达到细胞生长状态良好时，再进行冻存，具体操作步骤见细胞培养步骤。

PBMC收到后注意事项：
（1）收到PBMC细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现象发生请及时反馈。
（2）先不打开瓶盖，瓶身擦拭酒精后放培养箱静置四小时，稳定细胞状态，切忌在温箱内静置过夜。
（3）静置后镜检，拍照，记录细胞状态。建议传代后也拍照记录细胞生长情况。
（4）贴壁细胞：若细胞密度超过80%，可正常传代；若未超过80%，收集细胞瓶内的培养基，留8ml继续培养至80%左右再传代，瓶盖可稍微拧松。
（5）细胞瓶内的培养基含血清和双抗，可收集后4℃保存备用，可补加2%血清。刚开始传代时建议一半用细胞瓶内的培养基，一半用自备的培养基，使细胞逐渐适应培养条件，以免因不适应而造成生长状态不佳。
（6）细胞胰酶消化液建议使用PBS配制。