一文Get！CD3/CD28 磁珠介导的小鼠T细胞活化扩增解决方案

Keywords：T细胞活化扩增；CD3/CD28抗体偶联磁珠；IL-2；T细胞扩增培养基；CD3+ T；CD4+ T;CD8+ T；小鼠免疫试验；T cell activation and expansion;Anti-CD3/CD28 antibody-conjugated magnetic beads; T Cell Expansion Medium; Cell Therapy；Mouse immunological experiments;

在基础免疫学研究、肿瘤免疫模型构建、CAR-T细胞疗法临床前研究等领域，小鼠是常见的体外模型。其中，小鼠T细胞作为核心研究对象，其体外高效活化与扩增是实验成功的关键前提。小鼠T细胞与人类T细胞具有同源性，其活化同样遵循“三信号机制"，但因种属特异性差异，对活化试剂、培养条件的适配性要求更为严苛。IPHASE作为体外研究生物试剂引-领者，依托多年细胞培养技术积累，针对小鼠T细胞特性优化开发了包括CD3/CD28抗体偶联磁珠在内的全套活化扩增试剂，结合标准化实验流程与常见问题解决方案，为小鼠CD3/CD28介导的T细胞活化扩增提供高效、稳定、可重复的一站式解决方案，助力科研工作者高效推进实验进程。

01    小鼠T细胞活化扩增的“三信号机制"

T细胞活化扩增的“三信号机制"是免疫学中的核心概念，它详细描述了初始T细胞被完-全激活并增殖为效应细胞所必需的三种协同信号。缺少其中任何一个信号，都将导致T细胞失能、凋亡或仅产生微弱反应。

小鼠T细胞的完-全活化需依赖“三信号协同作用"，缺少任一信号均会导致T细胞失能、凋亡或增殖微弱，这一机制与人类T细胞活化原理一致，但需适配小鼠细胞的种属特异性：

1. 第一信号（抗原特异性信号）：由小鼠T细胞表面TCR-CD3复合物与抗原呈递细胞（APC）表面MHC-抗原肽复合物结合产生，是T细胞活化的“启动信号"，需通过抗小鼠CD3抗体特异性结合TCR-CD3复合物触发。

2. 第二信号（共刺激信号）：由小鼠T细胞表面CD28分子与APC表面B7配体结合产生，是避免T细胞“免疫无能"、维持活化持续推进的关键，需通过抗小鼠CD28抗体提供协同刺激。

3. 第三信号（增殖存活信号）：以IL-2（白细胞介素-2）为核心，作为关键细胞因子，其可特异性结合小鼠T细胞表面IL-2受体，激活下游JAK-STAT信号通路，推动T细胞从G0静息期进入细胞周期，实现大量增殖的同时，维持细胞活性与功能稳定性，促进其分化为效应T细胞或记忆T细胞，是小鼠T细胞扩增的“能量核心"。

其中，CD3/CD28抗体偶联磁珠是模拟体内APC功能的最-优工具，其通过模拟天然APC的粒径与立体结构，可与小鼠T细胞形成类免疫突触的高效结合模式，实现更均匀、高效的活化效果，显-著优于传统平板包被法，且磁珠的超顺磁性特性便于后续分离去除，不干扰后续实验（如流式检测、细胞功能实验等）。同时，针对小鼠T细胞的特性，抗小鼠CD3/CD28抗体经过特殊处理，确保对细胞的直接刺激活性，避免有害成分干扰细胞功能。

02    小鼠CD3/CD28磁珠介导的T细胞活化扩增标准化流程

IPHASE作为体外研究生物试剂引-领者，为满足基础免疫学研究、肿瘤免疫模型构建、CAR-T细胞疗法临床前研究等领域的快速发展需求，已开发、生产了小鼠T细胞活化扩增所需的培养基（T Cell Expansion Medium）与小鼠CD3/CD28 T细胞活化扩增磁珠（Anti-CD3/CD28 antibody-conjugated magnetic beads）等相关试剂。同时，为验证试剂的适用性，IPHASE技术人员使用IPHASE Mouse PBMC Isolation Kit （Cat.：071E100.11），从空白小鼠的全血中分离得到外周血单个核细胞（PBMC），后使用 IPHASE Mouse CD3/CD28TCells Activation/ Expansion Beads进行 CD3+ T 细胞的扩增。 具体流程及结果如下：

①将 IPHASE Mouse CD3/CD28 T Cells Activation/Expansion Beads 涡旋混匀。

②向PBMC中添加一半数量的 IPHASE Mouse CD3/CD28 T Cells Activation/ Expansion Beads,如 2x106个 PBMC添加 25μL 的 IPHASE Mouse CD3/CD28 T Cells Activation/Expansion Beads .

③350g 离心 5min，去掉上清液，以含 200IU/mL 的 IL-2 的 Mouse T Cell Expansion Medium 重悬细胞并调整细胞密度至 2×106cells/mL，转至培养皿中培养。

④激活后第 1 天不做处理，第 2 天补充与第 0 天等体积的含 200IU/mL 的 IL-2 的 Mouse T Cell Expansion Medium 培养基，于第 3 天使用磁力架移除磁珠，按照 0.5-1×106cells/mL 的密度继续在含 1000IU/mL 的 IL-2 的 Mouse T Cell Expansion Medium 中进行扩增培养。

⑤每日观察培养物，记录细胞大小和形态特征。当细胞培养物出现耗竭时，通常会观察到细 胞收缩和增殖速率下降的现象。

上图为按照如上操作得到的小鼠CD3+T细胞活化扩增结果图。IPHASE技术人员以300万PBMC为初始细胞，由图左清晰可知，13天时，小鼠CD3+T细胞扩增倍数高达322倍；且为验证T细胞的纯度，图右为扩增第九天时IPHASE技术人员使用了CD3+T和CD8+T细胞双阳抗体流式验证，纯度可达95%。说明IPHASE小鼠T细胞活化扩增相关试剂具有良好的市场竞争力，值得客户购买！

03    小鼠T细胞活化扩增常见问题及解决方案

小鼠T细胞活化扩增是基础免疫学研究、肿瘤免疫模型构建等领域的常规实验操作，应用广泛且流程日趋成熟，但在实际实操过程中，仍会因样本处理、试剂使用、培养条件等多种因素出现各类问题，影响实验效率与结果可靠性，以下结合实操经验，梳理常见问题并给出针对性解决方案，助力科研工作者高效推进实验。

Q1：T细胞活化效率低，无明显增殖的原因是什么？

常见原因：

①CD3/CD28磁珠与细胞比例不当（磁珠过多/过少）；

②IL-2浓度不足或失效（IL-2需低温保存，反复冻融易失效）；

③培养基营养不足或未适配小鼠T细胞；

④细胞初始活率过低（<85%）；

⑤孵育温度、CO₂浓度异常；

⑥磁珠与细胞孵育时间不足。

解决方案：

①调整磁珠与细胞比例至1:1（小鼠T细胞最-优比例，避免磁珠过多抑制细胞活力），孵育时间适当延长，确保磁珠与细胞充分结合；

②IL-2需-20℃避光保存，避免反复冻融，使用前快速复溶，配制后立即使用，活化阶段终浓度200IU/mL，扩增阶段1000IU/mL；

③更换IPHASE小鼠专用T细胞扩增培养基，添加专用培养基组分，补充特异性营养因子；

④分选前筛选活率≥85%的PBMC，可使用死细胞去除磁珠去除死细胞；

⑤严格控制培养条件：37℃、5% CO₂，饱和湿度，避免温度波动；

⑥若活化后细胞无明显增殖，可补充少量新鲜IL-2，延长扩增周期1-2天。

Q2：扩增过程中细胞活率持续下降？

常见原因：

①细胞密度过高，代谢废物堆积；

②培养基更换不及时，营养耗尽；

③IL-2浓度过高，产生毒性；

④磁珠未及时移除，持续刺激导致细胞耗竭；

⑤培养环境被污染（细菌、真菌）；

⑥细胞分选过程中损伤严重。

解决方案：

①每日监测细胞密度，当密度超过2×10⁶cells/mL时，及时稀释；

②每3天更换1次新鲜完-全培养基，及时去除代谢废物；

③调整IL-2浓度，扩增阶段不超过1000IU/mL，避免毒性作用；

④活化后第3天及时用磁力架移除磁珠，操作轻柔，避免损伤细胞；

⑤严格执行无菌操作，培养器材高压灭菌，培养基使用前检测有无污染，若发现污染，立即终止培养，更换试剂重新实验；

⑥分选过程中动作轻柔，避免反复吹打细胞，离心速度不超过350g，减少细胞损伤。

Q3：不同批次实验结果差异大，可重复性差？

常见原因：

①小鼠个体差异（年龄、体重、健康状况不同）；

②试剂批次差异，未进行批次验证；

③实验操作不规范（孵育时间、温度、离心速度不一致）；

④培养基配制不规范，IL-2浓度不准确；

⑤分选条件不统一。

解决方案：

①选用同品系、同年龄（6-8周龄）、体重相近的健康小鼠，每组实验至少3只，减少个体差异；

②使用IPHASE同一批次试剂，实验前对试剂进行活性验证；

③严格遵循标准化流程，固定孵育时间、温度、离心速度等参数，分选缓冲液、培养基配制严格按比例操作，做好实验记录；

④IL-2配制后立即使用，避免放置时间过长导致活性下降；

⑤统一分选策略（如均采用阴选法）和分选柱型号，确保分选条件一致。

04    IPHASE产品

综上所述，小鼠T细胞活化扩增实验应用广泛且流程日趋成熟，但仍有较多试验问题亟待解决。鉴于此，IPHASE作为体外研究生物试剂引-领者，研发、生产了高质量小鼠T细胞活化扩增相关试剂，包含小鼠CD3/CD28 T细胞活化扩增磁珠（Anti-CD3/CD28 antibody-conjugated magnetic beads）、T细胞扩增培养基（T Cell Expansion Medium）及重组IL-2等产品，是科研人员的不二-选择！

除小鼠T细胞活化扩增相关试剂外，IPHASE技术人员也开发出人T细胞活化扩增及全套免疫细胞相关试剂，为客户的细胞治疗研究提供一站式服务！产品列表如下：

IPHASE生产产品均具有以下优势：

 合规性 生产产品的组织均由正规渠道获得，来源清晰。

 安全性 生产组织均经过病原检测，保证产品质量安全。

 高质量 生产产品均经过严格的内部质控，且同批次数量多，批次间差异性小。

 可定制 可根据客户特殊需求，提供定制服务。