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IPHASE/汇智和源 体外哺乳动物细胞染色体畸变试验热点问题解答【下】

更新时间:2023-11-03      点击次数:476

体外哺乳动物细胞染色体畸变试验常见问题与解答

—热点问题—


第一题    一张玻片可观察到200个中期分裂相吗?如果不够,该如何处理?

大多数情况下,一张玻片很难找到200个可用于分析的中期分裂相,建议同一个剂量组多制作一些玻片,本公司一个剂量组通常会制作至少4张玻片,以保证足够中期分裂相细胞可供分析。


第二题    如何辨别细胞是否处于中期分裂相?

中期分裂相细胞染色体数目、形态比较固定,染色体包含两条染色单体,具体见下图:

图片1.png


第三题    有丝分裂指数测定的意义是什么?

中期分裂相指数是指所观察的细胞中中期分裂相细胞的占比,是一项反映细胞增殖程度的指标。


第四题    油镜如何使用?是否要将油镜镜头整个浸入油中?

油镜的使用需要搭配香柏油,香柏油与玻璃的折光率相近,光线穿过载玻片进入香柏油发生折射较少,而进入油镜的光较多,视野较为明亮。油镜使用时,需要将油镜镜头浸入香柏油中,并与玻片接触,使用结束后使用少量二甲苯擦拭干净镜头。


第五题    中期分裂相细胞少是什么原因导致?如何优化?

中期分裂相细胞少的原因如下:

(1)秋水仙素的剂量过小,作用时间过短;

(2)重悬时固定液量过大,细胞密度过低。


优化策略:

(1)秋水仙素剂量大,则作用时间短;

(2)秋水仙素剂量小,则适当延长作用时间,请选择适宜的剂量和时间;

(3)根据细胞的收集量确定重悬体积;

(4)适当增加滴片的数量。


第六题    染色体聚集可能是由哪些原因导致?

染色体聚集的可能原因如下:


(1)秋水仙素用量过多,导致染色体的过度浓缩;

(2)低渗时间不足,导致染色体聚集在一起分散不开;

(3)细胞悬液未充分吹打均匀;

(4)载玻片未进行预冷,玻片表面张力不够;

(5)滴片高度不够。


第七题    染色体分散过度可能是由哪些原因导致?

染色体分散过度的根本原因就是细胞膜破裂。主要由以下可能:


(1)低渗时间过长;


(2)离心速度过高;


(3)细胞操作过程不注意,操作过度;


(4)滴片距离过高。


第八题    染色体畸变试验阅片需要配套什么样的显微镜?如何操作?

染色体畸变试验使用中期分裂相阻断剂(如秋水仙素或秋水仙胺)处理细胞,使细胞停止在中期分裂相,此时染色体形态、数目都比较固定,使用普通生物显微镜即可进行染色体结构畸变观察。先于低倍镜下寻找背景清晰、分散良好、染色体收缩适中的中期分裂相细胞,再于油镜下进行染色体畸变观察并记录。


第九题    玻片想要长期保存,需要如何处理?

如果玻片要长期保存,必须要做好封片(可使用中性树脂胶并加盖玻片),并置于阴凉干燥处保存。


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