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染色体畸变测试程序是怎样的

发布时间:2022-04-20      点击次数:152
   染色体畸变试验用于鉴定在培养的哺乳动物体细胞中引起结构染色体畸变的物质。可应用于已建立的细胞系、细胞株或原代细胞培养,根据培养生长能力、核型的稳定性、染色体数目、染色体差异以及染色体响变的自发频率选择合适的细胞。
  染色体畸变测试程序如下:
  1.染色体畸变测试可以在原代人外周血淋巴细胞(HPBL)或已建立的细胞系中进行,例如中国仓鼠卵巢(CHO)细胞。
  2.在存在和不存在代谢活化(S9)的情况下,将培养物与几种浓度的测试化合物一起培养3到4小时,并在不存在S9的情况下培养21小时。
  3.阳性结果的特征是异常细胞在统计上显着的、剂量依赖性的增加,超过了历史的阴性对照限制。
  染色体畸变试验操作方法:
  受试物处理:在有和无代谢活化系统条件下,以受试物染毒处于增殖期的细胞。淋巴细胞应在有丝分裂刺激后的48h开始染毒。一般对每个浓度和阴性/溶剂对照应该用双份平行培养物。当本底资料可以证明双份平行培养物之间变异较小时,对每个浓度改用1个培养物也可以接受。气态或挥发性物质应以适当的方法试验,如用密闭的培养瓶。
收获时间:
  在一次试验,细胞应在有和无代活化条件下染毒3~6h,并在染毒开始后约1.5倍的正常细胞周期时采样。如此方案在有或无代谢活化时均为阴性结果,应再进行一次无代谢活化的试验,适当延长染毒时间。某些化学物在染毒/采样时间长于1.5倍正常细胞周期时更易检测。在有代谢活化条件下得到阴性结果,需要根据情况予以证实。如认为阴性结果不必进行证实,应提供适当理由。
  染色体制备:在收获前以秋水仙素或秋水仙胺处理细胞培养物1~3h。各个细胞培养物分别收获和低渗、固定和染色,以制备染色体。
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