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彗星试验原理及注意事项

发布时间:2021/1/11      点击次数:685

体内碱性彗星试验在化合物遗传毒性评价中的应用日益广泛。ICH S2(R1)已将肝脏彗星试验列为第2个组织/终点的体内试验;体内哺乳动物碱性彗星试验的指导原则(TG489)也已颁布。体内碱性彗星实验能够检测DNA链断裂、碱性不稳定位点、不完整切除修复引起的DNA链的断裂,能够制成合适细胞悬液的组织DNA损伤。与其他试验相比其检测的是单细胞水平的DNA损伤,因此该试验敏感性较高,操作简单,经济省时。

实验原理

彗星实验(comet assay)也称单细胞凝胶电泳试验(single cell gel electrophoresis.SCGE,是一种有效评估DNA损伤的方法。其原理是器官或组织经处理(如辐射、重金属等)后,细胞中的DNA发生单链或双链断裂,经细胞及其核膜裂解后,DNA解旋,在电场作用下,DNA 断片迁移出细胞核,形成彗星状的电泳图谱。正常细胞的大分子DNA在电场作用下迁移距离较短,DNA仍保留在细胞核的范围,形成圆形或轻微拖尾的图谱。根据电泳缓冲液的pH值不同,可分为中性彗星实验(pH=8.4)和碱性彗星实验(pH13)。中性彗星实验主要用于检测DNA双链的断裂损伤,碱性彗星实验具有更高的灵敏性,可用于检测更少量的单链和双链断裂损伤。

需要注意的是,试验过程中的个方面,包括样品准备、电泳条件、视觉分析参数(如染色强度、显微镜光强度以及使用显微镜滤镜和相机动态和环境条件(如背景照明)已经被研究,可能影响DNA迁移。

碱性彗星实验指导原则

TG489 In Vivo Mammalian Alkaline Comet Assay2016OECD Guideline for the Testing of Chemicals


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