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【系列二】IPHASE/汇智和源 体外药代动力学研究热点问题解答

更新时间:2023-07-21      点击次数:855

体外药代动力学研究


—热点问题—





第一题    酶诱导的受试物浓度一般设置多少?如果体系待测物溶解度很差有没有什么解决办法?

酶诱导试验需要设置3个不同的浓度,浓度水平需涵盖预期人体内有效血药浓度,最高浓度的选择至少比平均的人体内的有效血药浓度高一个数量级。如果在水相中溶解度很差,可以选择有机溶剂作为其溶剂,如DMSO,但是需要控制有机溶剂在体系中加入量。


第二题    在酶诱导试验中是否需要在酶活性和mRNA两个水平上进行评估?

通常需要结合酶活性和mRNA两个水平上的结果做结论,且mRNA水平更能真实反映诱导源头上的效应,且更为敏感。仅测量酶活性主要存在问题是:当同时存在抑制作用时,可能会掩盖诱导作用,而通过测量mRNA水平进行转录分析可解决该问题。且应通过阳性对照验证系统,证明其中所有主要的CYP酶有功能且可被诱导。


第三题    酶诱导研究中,研究初期为什么只关注CYP1A2,CYP2B6 和 CYP3A4三个酶?

CYP诱导的根源是药物与主要核受体的结合从而使相应的mRNA表达量增高,从而导致CYP酶表达水平的升高。其中,CYP3A、CYP2C的核受体是孕烷X受体(PXR),CYP1A2的核受体是多环芳香烃受体(AhR),CYP2B6的核受体是组成型雄烷受体(CAR),而CYP2D6则未发现可被诱导。若体外试验未见对 CYP3A4 酶的诱导,则可不必再评价对 CYP2C 酶的诱导作用;若在研药物体外研究结果显示可以诱导 CYP3A4,且结果提示应进一步开展临床试验,则需评估其诱导 CYP2C 的可能性。


第四题    在诱导试验中为什么要连续加药诱导?

一般情况下促变药应多次给药直至其达到稳态后,再评价其对底物药物的影响。若促变药并非诱导剂或者时间依赖型抑制剂,并且可证明单次与多次给药对酶/转运体的影响相似时,可采用单次给药进行 DDI 研究。


第五题    肝细胞代谢试验中阳参药物的代谢较参考数据慢很多,可以考虑哪些原因?

可能会有多种原因会导致该结果。首先,需要确认试验过程是否存在问题,不同厂家的产品在使用上会存在或多或少的差异,我们需参照产品COA确认自己的试验结果和厂家提供的数据是否存在差异。其次,确认肝细胞的质量是否达标,质量不好会直接影响试验结果。质量的确认可以从复苏存活率、维持状态等多个方面进行考察。


第六题    请问本公司是否可承接原代肝细胞相关项目?

本公司有专业的技术人员和完善的分析检测平台,可承接原代肝细胞相关项目,如果感兴趣可与我们商务人员对接。


第七题    什么情况下需要进行UGT表型研究?

体外或体内研究的数据显示UGT酶是候选药物的主要代谢酶时,需要考虑进行UGT表型研究。化学抑制法和重组酶法仍然是UGT酶表型研究的常用方法,但因UGT酶暂未筛选出较为全面的选择性较强的抑制剂,重组酶法常为其常用方法,也是有效的方法。


第八题    酶抑制研究中什么时候测定Ki值?

当IC50<1 μM时,强烈推荐进行Ki值测定;当IC50为1~10 μM之间,较为接近有效浓度时,也可以考虑测定Ki值。


第九题    是否需要评估化合物是否为时间依赖性抑制剂?

TDI是一种比可逆抑制带来更严重的副作用的状况,初步推荐单点法或2点法评估,高点可以为50×Cmax或剂量/250mL的0.1倍,一旦发现,则必须精确评估。


第十题    酶抑制试验中,底物的消耗量为什么要小于20%?

通常情况下,酶抑制试验我们会检测产物的生成量,会尽量选择相对高的底物浓度,且保证选择的孵育时间点是在线性反应时间点内。如果底物浓度过低,有可能会很快达到平衡,从而导致结果判定有误或难以判断。


十一题    酶抑制研究中,是否可以用Cocktail探针底物法?

文献和资料中提到,IND申报需要使用单底物法进行酶抑制研究的,筛选型研究可以使用cocktail探针法。


十二题    筛选阶段酶抑制试验可以不设置平行吗?

建议试验中设置平行,如果平行做不好,可能试验系统问题存在。设置平行可确保组内精密度、准确度得到有效控制,也是试验结果有效性的直接证据。 


十三题    体外代谢试验需要设计很多对照组,请问对照组是必须的吗?是否可以删减?

对照组的目的是考察化合物本身在不同组分中的稳定性,对照组结果稳定是整个代谢试验成立的前提条件。


十四题    化合物在有机溶剂中可以检测到,但加入孵育体系后检测不到?

初步判定可能是化合物在水相中溶解度不好或者化合物在水相环境中易水解导致的。若是由于在水相中溶解度不好导致,可优化样品前处理过程;若相同浓度化合物在水溶液和有机溶剂的响应相差50%以上,判定化合物易水解(0.1M PBS对某些化合物而言,可能存在基质效应,判定前需排除基质效应影响),不易进行体外代谢试验,建议确认化合物发生药效是化合物本身还是其水解产物。


十五题    有机溶剂的加入对试验结果有什么影响?

孵育体系中有机溶剂的含量要控制在1%以内。孵育体系中发挥代谢作用的组分是酶,而酶的本质是蛋白,有机溶剂加入过多,会导致酶变性,活性降低或丧失,故孵育体系中要控制有机溶剂的加入量。 


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