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微核试验方法原来是这样的

发布时间:2022-03-22      点击次数:409
  微核试验是遗传毒性研究的标准组合试验之一,广泛应用于食品、化工、药品、农药、饮用水等多种产品的遗传毒性评价。与体内实验相比,体外微核试验更简单快捷,避免了动物个体差异的影响,灵敏度高。体外微核试验主要包括体外哺乳动物细胞微核试验、人外周血淋巴细胞微核试验、肝原代细胞微核试验等。
  体外哺乳动物细胞微核试验是一种基因毒性试验方法,用于检测哺乳动物细胞在处理后是否产生微核。本试验适用于检测有丝分裂细胞在暴露于受试物期间或之后引起染色体断裂和诱导非整倍体的能力。如果3H~6h短期治疗的检测结果为阴性或不确定,则需要进行无代谢激活系统的长期治疗试验,相当于受试物处理细胞1.5~2.0个正常细胞周期。
  1、受试物
  固体测试物质应溶解在合适的溶剂中并稀释至合适的浓度。液体试验物质可直接使用或稀释至适当浓度使用。供试品应无菌并准备使用,否则必须确认储存不会影响其稳定性。
  2、细胞
  可选择仓鼠肺细胞系(V79、CHL)或卵巢细胞系(CHO)、小鼠淋巴瘤细胞系(L5178Y)、人外周血淋巴细胞系(如TK6)和原代培养细胞。推荐使用CHL细胞系或chl78l细胞系。细胞在使用前应检查染色体数目稳定性和支原体污染。
  3、测试方案的选择
  实验分为两种方案:使用和不使用cytob。
  方案一:
  细胞用待测物质处理后,在有丝分裂前使用cytob,然后观察和分析完成有丝分裂的细胞(双核细胞)的微核率。选择人淋巴细胞时,推荐方案一,因为不同来源的细胞周期不同,并非所有细胞都对植物血凝素(PHA)有反应。
  方案二:
  在没有cyb的情况下,用受试物质处理后观察和分析细胞的微核率。如果有证据表明受试物干扰了cytob的活性,或cytob可能影响细胞的生长(如小鼠淋巴瘤细胞系),推荐方案II。
  4、剂量
  至少应设置3个试验剂量。当供试物剂量至少为2~3时,可将最大剂量设定为最大剂量;当存在细胞毒性时,剂量范围应为55%至5%细胞毒性至几乎无细胞毒性。
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