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彗星试验的原理是怎样的?

发布时间:2022-01-17      点击次数:267
  彗星实验也称单细胞凝胶电泳试验,是一种有效评估DNA损伤的方法。其原理是器官或组织经处理(如辐射、重金属等)后,细胞中的DNA发生单链或双链断裂,经细胞及其核膜裂解后,DNA解旋,在电场作用下,DNA断片迁移出细胞核,形成彗星状的电泳图谱。正常细胞的大分子DNA在电场作用下迁移距离较短,DNA仍保留在细胞核的范围,形成圆形或轻微拖尾的图谱。根据电泳缓冲液的pH值不同,可分为中性彗星实验(pH=8.4)和碱性彗星实验(pH>13)。中性彗星实验主要用于检测DNA双链的断裂损伤,碱性彗星实验具有更高的灵敏性,可用于检测更少量的单链和双链断裂损伤。

 

彗星试验
 

 

  需要注意的是,试验过程中的个方面,包括样品准备、电泳条件、视觉分析参数(如染色强度、显微镜光强度以及使用显微镜滤镜和相机动态和环境条件(如背景照明)已经被研究,可能影响DNA迁移。
  每个实验室都应证明能够为所使用的目标组织获得足够质量的单细胞或细胞悬浮液,从而在彗星试验(cometassay)中建立实验能力。汇智泰康拥有多年毒理学服务与产品研发经验,针对不同遗传毒性试验开发针对试剂盒,包括彗星试验试剂盒。首先通过%尾DNA的评价,对照处理组动物%尾DNA在低范围内。目前的数据表明,尾部DNA百分比(基于平均中位数)在大鼠肝脏应该最好不要超过6%,这将是符合JaCVAM验证试验的值和其他出版和私有数据。目前还没有足够的数据对其他组织的最佳或可接受范围提出建议。这并不排除合理使用其他组织。测试报告应根据已发表的文献或专有数据,对彗星试验在这些组织中的性能进行适当的审查。首先,在对照组中,需要一个较低的%尾DNA范围,以提供足够的动态范围来检测阳性的影响。其次,每个实验室都应能够按照不同方式,对直接诱变剂和促进剂的反应。
 
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